检测原理图

第一步：基于Stem-Loop引物的逆转录反应；第二步：通过特异引物染料法或TaqMan探针实时检测PCR产物。（如上图）

技术特点：

（1） 特异性好 可有效区分成熟miRNA中5p和3p形式；

（2） 经济 可对多个miRNA同管逆转录，节约样本资源与反应成本；

（3） 检测分辨度高 可有效分辨低至10%的表达量差异；

（4） 重复性好 在对已知浓度miRNA进行梯度稀释后，线性关系好R2＞0.99（图2）；

（5） 准确性高 一个或多个参照基因与检测基因在同一管内RT反应，定量检测后校正表达量；

检测范例（has-miR-21检测结果）：

                                                          基因扩增图             

                    溶解曲线图

                                 表达量计算结果图