RACE(rapid-amplification of cDNA ends)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术。 RACE是基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA片段，通过往两端延伸扩增从而获得完整的3'端和5'端的方法. 近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends，RACE）是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3'末端的有效方法，以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。   

备注1. 对于样品中含量低的基因，我们可以使用特殊方法进行5′ RACE，具体定价。
                   2. 实验周期指RACE扩增长度为基础长度时所需的时间；样品特殊、样品个数多和使用特殊方法时，实验周期顺延。

技术原理：

       3'-RACE的实验原理及流程：利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作为一个引物结合位点，以连有SMART寡核营酸序列通用接头引物的Oligo（dT）30MN作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA.然后用一个基因特异引物GSP1（gene specific primer，GSP）作为上游引物，用一个含有部分接头序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作为下游引物，以cDNA第一链为模板，进行PCR循环，把目的基因3' 末端的DNA片段扩增出来。（见Figure 1）

                                                                                 Figure 1

5'-RACE的实验原理及流程:先利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作为一个引物结合位点，以Oligo（dT）30MN作为锁定引物在反转录酶MMLV作用下，反转录合成标准第一链cDNA.利用该反转录酶具有的末端转移酶活性，在反转录达到第一链的5'末端时自动加上3-5个（dC）残基，退火后（dC）残基与含有SMART寡核苷酸序列Oliogo（dG）通用接头引物配对后，转换为以SMART序列为模板继续延伸而连上通用接头（见Figure 2 ）。然后用一个含有部分接头序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作为上游引物，用一个基因特异引物2（GSP 2 genespecific primer，GSP）作为下游引物，以SMART第一链cDNA为模板，进行PCR循环，把目的基因5'末端的cDNA片段扩增出来。最终，从2个有相互重叠序列的3'/ 5'-RACE产物中获得全长cDNA，或者通过分析RACE产物的3'和5'端序列，合成相应引物扩增出全长cDNA。

                                                              Figure 2.

服务内容：

1. 总RNA的提取及定量

2. RNA反转录

3 . RACE PCR实验

4. 结果分析

5. 实验报告整理

客户提供：

1. 提供细胞或组织标本，同时应保证材料新鲜，动物细胞数为106个以上，动物组织为50 mg以上，如提供RNA模板，需保证模板质量且不小于10mg.

2. 提供检测基因的序列信息及相关文献资料。

结果内容：

1. 扩增电泳图

2. 全长CDNA序列及测序报告

3. RACE实验步骤、使用仪器、引物序列等

服务说明：

1. 样品：请尽量提供目的基因表达量高的单一样品。
2.提取Total RNA的材料要新鲜样品（组织为100-150 mg/样，细胞>106个/样），若为冻存样品，请于-70℃以下保存并自备干冰以便运输。

3.Total RNA无降解，OD260/280=1.8 ~ 2.0。
4.请提供尽量多的实验材料：3′ RACE Total RNA＞15 μg；5′RACE Total RNA＞25 μg。如果基因的含量较低或者未知序列较长，样品量需相应增加。

对于已知序列：
1. 请提供大于200 bp的已知序列(请注明已知序列的5′ 端及3′端)；如果已知序列比较短，建议先进行3′ RACE再进行5′ RACE，以提高实验的成功率。
2. 如果您有实验数据和参考文献等，也请发送给我们，这将会帮助我们更好地理解您的实验背景，有利于实验的顺利进行。
3. 我们会根据已知序列进行特异性扩增，如果得不到目的序列或为非目的基因的序列，我们将停止实验并收取实验成本费用。如果得到序列与您提供的序列有个别碱基不符，我们在征求您的意见后决定是否进行RACE实验。

4. 经验证，样品中基因含量低时，我们将与您沟通后，决定下一步实验使用的方法。
5. 由于mRNA存在个体和组织差异或基因的序列特殊，RACE的PCR产物测序有时会有个别碱基是套峰或测不通的情况，对未测通部分可继续进行克隆测序，最终提供两个质粒的测序结果，碱基的准确性由您自行判断。
6. 如果您的样品为原核生物，我们不保证调取的序列为3′ 和5′端全长序列。

服务要求：

请认真填写荧光定量PCR检测技术服务委托单,并联系技术人员将委托单发送至：support@novland.com.cn。