全血总RNA抽提试剂盒

Blood Total RNA Extraction Kit

全血总RNA抽提试剂盒

【产品简介】

  本试剂盒采用独特的配方和添加剂，能高效的分离血液中的RNA，另外本试剂还可以有效地抑制各种外源性和内源性的RNA酶，同时结合特制的纯化柱，能最大限度的保持RNA的完整性、高得率以及纯度，可用于RT-PCR、Real Time PCR、 芯片分析、Norther Blot等下游实验，并能保留小RNA，为需要进行小RNA研究，如MicroRNA的用户提供了强有力的工具。

 【试剂盒组成】

注意： 1. 本试剂盒最多处理2ml健康人类全血（健康人的全血中白细胞含量约为4000-7000个白细胞/ul血液，本试剂盒最多处理白细胞数约为10⁷）

        2. 本试剂盒只适用于新鲜全血，不适用于冻存处理的血液。

3. 使用前请在按照标签提示，向漂洗液WB加入适量无水乙醇.

【试剂运输及储存条件】

试剂运输可在2-8℃环境下进行。储存时，裂解液LZ须置4℃保存，其余组分可保存在室温。本试剂盒有效期为12个月，请在有效期内使用。

【操作步骤】

1.       在血液样品中加入3倍体积红细胞裂解液 （例如，300μl血液加入900μl红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5分钟，期间再颠倒混匀几次，10000g离心1分钟（若是离心机最高转速不允许，可以2500g离心5分钟），吸去上清，留下白细胞沉淀进行后续操作。如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤1次。通常极微量的红细胞不会影响后续的 一些检测。

2.       洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃 上清。可再重复1次，共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。

3.       将1ml裂解液LB的加入到白细胞沉淀的离心管中用移液器吹打数次混匀。将裂解物转移至无RNA酶的1.5ml离心管中，充分振荡30s，之后操作见第4步。

注意：如果不是正常人类全血，需要根据血液中的白细胞数量确定裂解液LB使用的量，以保证白细胞被完全裂解。

4.       把裂解物于室温静置5min后，加入0.2ml三氯甲烷，小心盖上管盖，剧烈摇动15s。

5.       将离心管再次置于室温2-3min，然后4℃，12,000 x g离心15min。

注意：离心会使溶液分为三相，含有RNA的水相上清液，包含蛋白和DNA的中层以及包含DNA的下层有机相。在 4℃离心对于溶液的分层是非常关键的。

6.       将上清水相转移至另一新的无RNA酶离心管中，并加入1.5倍体积的100%乙醇，漩涡振荡混匀5s。

7.       立即吸取700μl样品以及有可能形成的沉淀，加入带有2ml收集管的离心纯化柱，轻盖盖子，室温静置2min。10,000 x g，室温离心15s，弃尽废液。

8.       将剩余的样品转移至离心柱，重复第7步。

9.       往离心柱中加入700μl漂洗液WB，轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，弃尽废液。

注意：第一次使用前请确认是否已经按照标签提示往WB中加入适量无水乙醇。

10.   往离心柱中加入500μl漂洗液WB，轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，弃尽废液。

11.   重复第10步，往离心柱中加入500μl漂洗液WB，轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，弃尽废液。洗涤后10,000 x g离心空柱2min干燥硅胶膜。

注意：完全去除洗液对最后溶解是非常重要的，洗液的残留会影响最终的洗脱。

12.   将离心柱转移至一新的无RNA酶的1.5ml离心管中，往硅胶膜中央滴加洗脱液EB，轻盖管盖，室温静置5min，10,000 x g 离心1min洗脱RNA。

注意：洗脱体积不宜小于30μl，否则会影响洗脱效果。

13.   把洗脱液滴加回硅胶膜重复第7步洗脱。

14.   如需后续操作，请始终将溶解的RNA至于冰上，保存请置于-80℃。