NL Hotstart Taq DNA Polymerase
产品分类： 一般PCR相关制品
主要产品有：本制品是抗Taq单克隆抗体和NL Taq DNA Polymerase的混合制品，适用于Hot Start PCR。高温加热前，抗Taq单克隆抗体与NL Taq DNA Polymerase结合，抑制聚合酶的活性，从而抑制低温条件下由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq单克隆抗体在PCR反应最初的DNA变性步骤已变性，因此无需特殊失活处理，在常规PCR反应条件下即可使用。使用本试剂扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，可直接克隆于T-Vector中。
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产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品价格 |
LH-0102A | NL Hotstart Taq DNA Polymerase | 200U | 300.00元 |
LH-0102B | 1000U | 1350.00元 |
【产品简介】
本制品是抗Taq单克隆抗体和NL Taq DNA Polymerase的混合制品，适用于Hot Start PCR。高温加热前，抗Taq单克隆抗体与NL Taq DNA Polymerase结合，抑制聚合酶的活性，从而抑制低温条件下由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq单克隆抗体在PCR反应最初的DNA变性步骤已变性，因此无需特殊失活处理，在常规PCR反应条件下即可使用。使用本试剂扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，可直接克隆于T-Vector中。
【试剂组成】
试剂组成 | 200 U | 1000 U |
NL Taq HS (2.5U/μl) | 80 µl×1支 | 400 µl×1支 |
10×PCR Buffer | 1 ml×1支 | 1 ml×5支 |
dNTP Mixture（各2.5 mM） | 800 µl×1支 | 800 µl×5支 |
MgCl2 Solution（25 mM） | 1 ml×1支 | 1 ml×5支 |
说明书 | 1份 | 1份 |
10×PCR Buffer:
Tris-HCl（pH8.3） | 100 mM |
KCl | 500 mM |
dNTP Mixture:
浓度 | 各2.5 mM |
状态 | 水溶液（Na盐，pH7.0-9.0） |
纯度 | 各98%以上 |
注：dATP、dGTP、dCTP、dTTP的等摩尔的混合物，不用稀释可直接用于PCR反应。
【活性定义】
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，摄入10 nM的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
【PCR性能】
1、 以人的基因组DNA为模板，可很好地扩增3.0 kbp（p53基因）的DNA片段。
2、 55℃条件下反应10分钟，抗体对Taq聚合酶的活性抑制效率达90%以上。
【用 途】
3、 Hot Start PCR法扩增DNA。
4、 DNA序列测定。
5、 TA克隆实验。
【反应举例】
1. PCR试剂准备：
注意：以下举例为常规PCR反应体系，仅供参考。实验条件因模板、引物等的结构不同各异，需要根据模板、目的片段大小、碱基序列和引物长短等具体情况，设定最佳反应条件，实际PCR反应可根据模板等的不同，调整反应体系中的Mg2+浓度，设置最优反应体系，该酶的延伸温度可以在60℃-70℃之间调整。
以人的基因组DNA为模板进行Hot Start PCR扩增反应，扩增长度1KB。
反应成分 | 体积/反应 | 终浓度 |
10×PCR Buffer | 5 ml | 1× |
NL Taq HS (2.5U/μl) | 0.4-1 ml | 0.02 -0.05 U/ml |
dNTP Mixture（各2.5 mM） | 2-4 ml | 100-200 mM |
MgCl2 Solution（25 mM） | 3-10 ml | 1.5-5 mM |
Forward Primer（20mM） | 0.25-0.5 ml | 0.1-0.2 mM |
Reverse Primer（20mM） | 0.25-0.5 ml | 0.1-0.2 mM |
模板DNA | 3-5 ml | |
ddH2O | 补水至50 ml | |
总体系 | 50 ml |
2. PCR反应循环参数设定：
注意：请参照各类仪器的操作软件进行设置。
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | |||
Roche LightCycler | 非 Roche 仪器 | Roche LightCycler | 非 Roche 仪器 | |||
1 | 预变性 | 94℃ | 94℃ | 2分钟 | 2分钟 | 1 |
2 | 变性 | 94℃ | 94℃ | 15秒 | 20秒 | 40 |
退火 | 55℃ | 55℃ | 30-40秒 | 30-40秒 | ||
延伸 | 72℃ | 72℃ | 30-60秒 | 40-60秒 | ||
3. 结果检测：反应结束后取10 ml反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
【注意事项】
1.待检标本若不及时检测，应保存于-20℃。
2.实验相关耗材应用0.1％DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃处理12小时，并高压灭菌30分钟后使用。
3.试剂盒各组份使用前请充分融化并摇匀，离心管内的试剂需离心数秒后使用。
4.PCR操作各阶段应在不同实验区域进行，包括PCR扩增试剂准备区、标本处理区及PCR扩增检测区。
5. PCR操作人员应穿工作服，戴一次性手套（经常替换手套），使用一次性用品。
6.PCR操作人员应具有经验和受过培训。
7.操作过程中用到的超净台、加样枪、离心机、扩增仪等仪器设备应经常用10%次氯酸或70%乙醇及紫外灯处理。
8.实验中废弃的吸嘴应弃于含10%次氯酸的废液缸中， 以防止污染。
9.实验后，扩增管切勿打开，并且将其丢弃在实验区以外区域。
【试剂运输及储存条件】
试剂盒运输可在2-8℃环境下进行。须置-20℃保存，有效期为18个月，请在有效期内使用。
注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
