Two Step Stemaim-it miR qRT-PCR Quantitation Kit(SYBR Green)

Two Step Stemaim-it miR qRT-PCR Quantitation Kit(SYBR Green)

                                                保 存：-20℃避光

【产品简介】

本制品是采用嵌合荧光法（SYBR^® Green I）进行miRNAs qRT-PCR的专用试剂。Stemaim-it miR qRT-PCR miRNAs定量检测方法，采用特异性的Stem-loop RT adapter与miR PCR Primer双重保证，确保反应不受其前体及其他因素干扰，序列高度同源的miRNAs也可精确区分。精确定量，可对每个细胞所含的目标miRNA分子多少进行准确定量。检测灵敏度高，样品消耗量少，仅需1-10ng的total RNA或同等物。同时又具备超宽的定量线性范围，从几个拷贝一直到几百万个拷贝，定量线性范围跨越7个数量级。可实现对目标miRNA分子进行准确定量并具有很好的重复性。PCR Master Mix(2×)含有PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂，浓度为2×，同时添加了ROX内参染料，使结果更加准确可信。

【试剂盒组成】

A.     反转录反应试剂：

B. PCR反应试剂试:

【适用荧光PCR仪器】

   注意：ABI Prism7500，ABI Prism7500 Fast, MJ Research Chromo4，Corbett Rotor Gene 3000机型，添加ROX Reference Dye 0.04µl/反应。

ABI Prism7000/7300/7700/7900 , Eppendorf , ABI Step One, ABI Step One Plus机型，添加ROX Reference Dye 0.4µl/反应。

【操作步骤】

1.       完全融化模板，RT Master Mix(2×)、miR RT Primer、RT Enzyme Mix等试剂融化，离心后置于冰浴上。

2.       将Synthetic miR Standard(1nM)溶化后，进行离心，并用Standard Dilution稀释100倍后，作为阳性对照使用，若需要做梯度标准曲线，请用Standard Dilution进行梯度稀释(注意：Synthetic miR Standard的浓度较高，操作中易造成反应中的污染，如果您不需要进行梯度实验，请勿使用，如果需要进行相关实验，相关的实验操作单独在超净台中进行)。

3.       PCR试剂准备：在冰浴条件下按下表配制反应液（举例）

反转录反应：

循环参数设定：（请参照各类仪器的操作软件进行设置）

将逆转录的cDNA取出2μl作为模板进行PCR反应

PCR反应：

注意：ABI Prism7500，ABI Prism7500 Fast,MJ Research Chromo4，Corbett Rotor Gene 3000机型，需要添加50xROX Reference Dye 0.04μl/反应。

ABI Prism7000/7300/7700/7900 , Eppendorf , ABI Step One, ABI Step One Plus机型，需要添加ROX Reference Dye  0.4μl/反应。

PCR反应循环参数设定：（请参照各类仪器的操作软件进行设置）

【试剂运输及储存条件】

试剂盒运输可在2-8℃环境下进行。（试剂含有ROX内参染料），储存时，须置-20℃保存。

【有效期】

本试剂盒有效期为12个月，请在有效期内使用。

注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。