BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)

BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)

【产品简介】

BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。灵敏度高，检测浓度下限达到10μg/ml，最小检测蛋白量达到0.2μg，待测样品体积为1-20μl。在20-1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20,60,80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。每个试剂盒可以检测200个样品。    

【试剂盒组成】

【试剂运输及储存条件】

试剂运输可在常温环境下进行。储存时，BCA试剂 A须置4℃保存，蛋白标准配制成溶液后-20℃冻存，其余组分可保存在室温。本试剂盒有效期为12个月，在有效期内使用。

【实验注意】

1.       实验需酶标仪测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。需96孔板。如果没有酶标仪，可使用普通的分光光度计测定，测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时，可以测定的样品数量可能会显著减少。

2.       如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒(NWQ001)。

3.       为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。

4.       EDTA浓度必需小于10mM，不兼容EGTA。不适用BCA法时，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒(NWQ001)。

【操作步骤】

1. 取0.8ml蛋白标准配制液加入到蛋白标准(20mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白标准溶液。配制后可立即使用，也可以-20℃长期保存。（注意：配制蛋白标准溶液前，低速离心蛋白标准(BSA)数秒）

2. 取适量25mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为0.5mg/ml。例如取20μl 25mg/ml蛋白标准，加入980μl稀释液即可配制成0.5mg/ml蛋白标准。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准也可以-20℃长期保存。

3. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml BCA试剂A加100μl BCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室温24小时内稳定。

4. 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到20μl。

5. 加适当体积样品到96孔板的样品孔中，加标准品稀释液到20μl。

6. 各孔加入200μl BCA工作液，37℃放置30分钟。注: 也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。

7. 测定A562，540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。