新鲜动物组织和细胞线粒体DNA抽提试剂盒
产品分类： 基因组DNA抽提
主要产品有：线粒体是存在于绝大多数真核细胞内的一种基本的重要的细胞器。它是细胞进行氧化磷酸化的场所。线粒体基因组不仅是研究DNA结构与复制转录的良好模型，也是研究真核细胞核酸与蛋白质合成非常合适的模型系统。本试剂盒提供了一套方便的工具从各种细胞和组织中提取MTDNA，产量高，纯度好，不污染基因组DNA。纯化的MTDNA可用于多种研究，比如酶处理分析、Southern blotting、克隆、PCR分析以及扩增等。
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新鲜动物组织和细胞线粒体DNA抽提试剂盒
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品价格 |
LG-0107 A | 50次 | 500.00元 | |
LG-0107 B | 100次 | 900.00元 |
【产品简介】
线粒体是存在于绝大多数真核细胞内的一种基本的重要的细胞器。它是细胞进行氧化磷酸化的场所。线粒体基因组不仅是研究DNA结构与复制转录的良好模型，也是研究真核细胞核酸与蛋白质合成非常合适的模型系统。本试剂盒提供了一套方便的工具从各种细胞和组织中提取MTDNA，产量高，纯度好，不污染基因组DNA。纯化的MTDNA可用于多种研究，比如酶处理分析、Southern blotting、克隆、PCR分析以及扩增等。
【试剂盒组成】
试剂盒组成 | LG-0107A(50次) | LG-0107B(100次) |
缓冲液SE | 60ml | 120ml |
RNase A(10mg/ml) | 360μl | 720μl |
溶液MTA | 12ml | 24ml |
溶液MTB | 24ml | 48ml |
溶液MTC | 18ml | 36ml |
漂洗液WB | 12ml | 24ml |
洗脱液EB | 2×2ml | 4×2ml |
离心纯化柱 | 50个 | 100个 |
说明书 | 1份 | 1份 |
【试剂运输及储存条件】
试剂运输可在室温环境下进行。储存时，溶液MTA加入RNase A后须置4℃保存，溶液MTC可置4℃保存，其余组分可保存在室温。
【操作步骤】
1. A: 从组织中提取线粒体DNA，在冷冻的研钵中切下约50-150mg深层冷冻的组织样品，并用电子天平称量。然后立即将该组织转移至加有1ml缓冲液SE的无核酸酶的离心管中，用电动匀浆机在冰浴中匀浆组织约30s-60s直到看不见明显的组织块，之后操作见第2步。
注意：组织样品应储存于液氮或低温冰箱(-80℃)。该实验流程只适用于100mg的组织样品中抽提线粒体DNA，如果样品比较多，则需要适量多加缓冲液SE匀浆。
B: 从细胞样品中提取线粒体DNA，先把培养皿或培养瓶置于冰上，弃尽培液，用预冷的1XPBS洗涤细胞两次。然后加入1ml缓冲液SE，用细胞刮刮下所有细胞，将裂解物转移至无核酸酶的2ml离心管中，在冰浴中匀浆30s~60s，之后操作见第2步。
注意： 1. 试剂盒中不提供 1XPBS，可另外索取。2. 重悬细胞还可以先将细胞2000xg，离心3min，用1XPBS洗涤后再加入1ml缓冲液SE。3. 该实验流程只适用1X107细胞中提取线粒体DNA，否则就需要更多的缓冲液SE。
2. 把裂解物于冰浴中静置5min后，4℃，1000xg低温离心10min。
3. 弃沉淀，小心吸取上清至另一新的无核酸酶离心管，将上清液于4℃，14000xg低温离心30min。
4. 弃上清，得到线粒体沉淀。往沉淀中加入150μl预冷的溶液MTA，用移液器吹散混匀沉淀。
注意：请确认是否已经往溶液MTA中加入RNase A。
5. 将裂解物于37℃温水浴 1hr 以彻底除去RNA。
6. 往裂解物中加入300μl溶液MTB，轻柔颠倒离心管10次混匀，至于冰浴变性7min。
7. 加入225μl溶液MTC，轻柔颠倒离心管10次混匀，至于冰浴复性30min。
8. 4℃，12000xg低温离心6min。
9. 小心吸取上清至一新的离心管，加入0.6倍体积的异丙醇，用移液器吸打混匀。
10. 立即吸取700μl样品以及有可能形成的沉淀，加入带有2ml收集管的离心纯化柱。轻盖盖子，11,000 x g，室温离心15s，弃尽废液。
11. 将剩余的样品转移至离心柱，重复第10步。
12. 往离心柱中加入500μl漂洗液WB，轻盖盖子，11,000 x g，室温离心15s，弃尽废液。
注意：第一次使用前请确认是否已经按照标签提示往WB 中加入适量无水乙醇。
13. 重复第12步，用500μl 漂洗液WB再次洗涤离心柱，最后一次洗涤后，11,000 x g离心空柱1min干燥硅胶膜。
注意：完全去除洗液对最后溶解是非常重要的，洗液的残留会影响最终的洗脱。
14. 将离心柱转移至一新的无RNA酶的1.5ml离心管中，往硅胶膜中央滴加60μl无核酸酶水，轻盖管盖，室温静置1min，11,000 x g 离心1min洗脱RNA。
注意：洗脱体积不宜小于50μl，否则会影响洗脱效果。
15. 把洗脱液滴加回硅胶膜重复第14步洗脱。
16. 如需后续操作，请始终将溶解的DNA至于冰上，保存请置于-80℃。
【DNA定量】
实例：用常规比色皿测量DNA浓度。
DNA样品总体积：50μl
稀释因子，1:100（10μl DNA样品+990μl无核酸酶高压灭菌水）
A260读值：0.20（在1ml比色皿中测量）
因此，DNA样品浓度= 50×A260×稀释因子=50×0.20×100=1000μg/ml
DNA样品的得率=1000×0.05=50μg
【注意事项】
1. 操作时请使用一次性手套和口罩。
2. 第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB中加入适量乙醇。
3. 为增加洗脱效果，可将洗脱液EB于65℃水浴加热后使用。
【有效期】
本试剂盒有效期为12个月，请在有效期内使用。
注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
