血液基因组DNA快速提取试剂盒

Blood genome DNA Kit

血液基因组DNA快速提取试剂盒 

【产品简介】

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取血液中的基因组DNA。离心吸附柱高效、专一吸附DNA, 可有效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。 使用本试剂盒纯化的DNA适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等各种常规实验和芯片杂交、高通量测序等高质量DNA需求的实验。

【试剂盒组成】

注意：使用前请在蛋白酶K管中加入适量灭菌双蒸水至20mg/ml，漂洗液WB1和WB2中加入适量无水乙醇。

【试剂运输及储存条件】

试剂运输可在常温环境下进行。储存时，蛋白酶K干粉于4℃保存，RNA酶A和稀释后的蛋白酶K溶液于-20℃保存，试剂盒其余组分室温保存。

【操作步骤】

1.       处理血液样品(本产品适用于处理100μl-1ml血液样品):

a.提取200μl血液样品时，可直接进行下一步实验。

b.提取小于200μl血液样品时，可加裂解液SE补足体积至200μl,再进行下一步实验。

c.提取大于200μl血液样品时，需细胞裂解液CL处理,具体步骤如下:在样品中加入 1-2.5倍血液样品体积的裂解液SE，颠倒混匀，10,000 rpm离心2 min,吸去上清，留下细胞核沉淀

d.当处理血样为血凝块，加入1-2.5倍血液样品体积的裂解液SE，颠倒混匀,10,000 rpm离心2min，吸去上清，留下细胞核沉淀，再进行下一步实验。

2.       往裂解物中依次加入280μl裂解液PDB，5μl RNA酶A和10μl蛋白酶K（20mg/ml）溶液，用移液器吸打混匀，于55℃温水浴消化10min。

    注意：请不要漩涡震荡

3.  吸取上清至一新的1.5ml离心管中，往裂解物中加入1.5倍无水乙醇，轻柔颠倒混匀。

4.  立即吸取700μl样品以及有可能形成的沉淀，加入带有2ml收集管的离心纯化柱。轻盖盖子，11,000xg，室温离心1min。

5.  将剩余的样品转移至离心柱，重复第4步。

6.  往离心柱中加入700μl漂洗液WB1，轻盖盖子，室温静置1min，11,000xg，室温离心1min，弃尽废液。

注意：第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB1中加入适量无水乙醇。

7.  往离心柱中加入500μl漂洗液WB2，11,000xg , 室温离心1min，弃尽废液。

注意：第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB2中加入适量无水乙醇。

8. 往离心柱中加入500μl漂洗液WB2，11,000xg , 室温离心1min，弃尽废液。

9. 11,000xg离心空柱1min干燥硅胶膜。

10. 将离心柱转移至新的无核酸酶的1.5ml离心管中，往硅胶膜中央滴加50μl洗脱液EB，轻盖管盖，室温静置2-3min，11,000xg离心1min洗脱基因组DNA。

11.把洗脱液滴加回硅胶膜重复第10步洗脱。

12.   如需后续操作，请始终将溶解的DNA至于冰上，保存请置于-80℃。

【DNA定量】

实例：用常规比色皿测量RNA浓度。

DNA样品总体积：50μl

稀释因子，1:100（10μl DNA样品+990μl无核酸酶高压灭菌水）

A260读值：0.20（在1ml比色皿中测量）

因此，DNA样品浓度= 50×A260×稀释因子=50×0.20×100=1000μg/ml

DNA样品的得率=1000×0.05=50μg

实例：用超微量比色皿测量DNA浓度。

DNA样品总体积：50μl

稀释因子，1:100（1 μl DNA样品+99 μl无核酸酶高压灭菌水）

A260读值：0.20（在超微比色皿中测量）

因此，DNA样品浓度= 50×A260×稀释因子=50×0.20×100=1000μg/ml

DNA样品的得率=1000×0.05=50μg

【注意事项】

1. 操作时请使用一次性手套和口罩。

2. 第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB1和WB2中加入适量乙醇。

3. 第一次使用前请确认是否已经往蛋白酶K管中加入适量灭菌双蒸水。

4. 洗脱液EB如预先在65℃温水浴，会提高基因组DNA的回收率。

注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。