真菌基因组DNA提取试剂盒(离心柱)

Fungus Genomic DNA Extraction Kit（Spin Colunm）

真菌基因组DNA提取试剂盒(离心柱)

【产品简介】

    本产品用于快速提取各种真菌的基因组DNA，其中包括酵母（如：Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pomb、Pichia pastoris）、动物病原真菌（如：Candida albicans、Aspergillus niger）和植物病原真菌（如：Collectotrichum musae、Fusarium oxysporum）。纯化的基因组DNA可用于多种研究，比如酶处理分析、Southern blotting、克隆、PCR分析以及扩增等。

【试剂盒组成】

注意：使用前请在按照标签提示漂洗液WB1、WB2中加入适量无水乙醇。如不立即使用，RNase置于4℃保存。

【试剂运输及储存条件】

试剂运输可在室温环境下进行。4℃长期保存，有效期一年。

【自备实验器材】

试剂类：异丙醇、无核酸酶水。

耗材类：经无核酸酶水处理并高压灭菌（121℃，30分钟）的2ml和1.5ml离心管及10μl、200μl、1000μl吸嘴、一次性手套、口罩。

设备类：电动匀浆机、各种规格的移液器、低温和常温台式离心机、震荡仪、研钵，手术刀，金属镊，水浴锅，冰盒。

【操作步骤】

1.       取适量真菌菌丝（200-500mg）用电子天平称量，放入液氮中研磨至粉末状。然后立即将该组织转移至加有600μl裂解液PLB的无核酸酶的离心管中，如仍有块状物质，用电动匀浆机在冰浴中匀浆组织约15s直到看不见明显的组织块。

注意:如果裂解液PLB有沉淀，需先在65℃加热溶解后摇匀再使用。

处理标本前可以先往PLB中加入1-4%巯基乙醇。

2.       用移液器吸打混匀，65℃水浴10-30min，每隔5 min上下轻轻颠倒混匀。

3.       4℃离心10min，小心吸取上清至RNase-Free的离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的残渣碎片。分离出的上清液中加入10μl RNase A，用移液器缓慢吸打混匀，37℃放置10 min。

4.       冷却至室温后，加入500μl三氯甲烷，充分混匀离心管直至混匀，切勿漩涡震荡。10,000 rpm离心5min。

5.       小心吸取上清至另一干净的无核酸酶的离心管中，加入0.6倍上清体积的预冷异丙醇，轻柔颠倒数次直至彻底混匀。

6.       吸取700μl裂解物以及有可能形成的沉淀至纯化柱，室温11,000rpm离心15s。

7.       弃尽流穿液，重复步骤6，直至将剩余样品全部通过纯化柱。

8.       往纯化柱内加入500μl漂洗液WB1，室温11,000rpm离心15s，弃尽流穿液。

注意：第一次使用前，按照标签提示加入适量无水乙醇。

9.       往纯化柱内加入500μl漂洗液WB2，重复步骤9。

注意：第一次使用前，按照标签提示加入适量无水乙醇。

10.   室温11,000rpm离心空柱1min干燥硅胶模。

11.   往膜中央滴加50μl 65℃预热的洗脱液EB，室温放置5min，室温11,000rpm离心1min，收集DNA。

12.   重复步骤11。

 注意：为增加基因组DNA的得率，洗脱液体积不应少于50μl，体积过小会影响回收效率，洗脱液的pH值也对洗脱效率有很大影响，若用ddH₂O洗脱液应保证pH 7.0-8.5范围内，pH低于7.0会影响洗脱效率；DNA需置于-20℃保存，以防止DNA降解。

【注意事项】

1. 操作时请使用一次性手套和口罩。

2. 第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB1，WB2中加入适量乙醇。

3. 为增加洗脱效果，可将洗脱液EB于65℃水浴加热后使用。

【有效期】

本试剂盒有效期为12个月，请在有效期内使用。

注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。