DNA甲基化是一种表观遗传修饰,它是由DNA甲基转移酶 (DNA methyl-transferase, Dnmt) 催化S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶 (mC) 的一种反应,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是唯一存在的化学性修饰碱基。CG二核苷酸是最主要的甲基化位点,它在基因组中呈不均匀分布,存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的区域,在哺乳动物中mC约占C总量的2-7%。一般说来,DNA的甲基化会抑制基因的表达。DNA的甲基化对维持染色体的结构、X染色体的失活、基因印记和肿瘤的发生发展都起重要的作用。
服务编号 | 服务名称 | 内容说明 | 周期 | 价格 |
NLS-008 | DNA CpG甲基化检测—MSP法 (客户提供引物) | PCR优化 | 1周 | ¥1200/基因 |
NLS-009 | DNA CpG甲基化检测—MSP法 (客户不提供引物) | 引物设计 | 1-2周 | ¥100/基因 |
NLS-010 | DNA CpG甲基化检测—BSP法 | PCR产物直接测序,包括引物设计,不包括合成 | 1-2周 | ¥1000/样品 |
NLS-011 | D DNA CpG甲基化检测—BSP法 | 克隆测序,提供5个有效克隆 | 4-5周 | ¥1500/基因·样品 |
服务项目:
1.甲基化特异性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)
用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在甲基化;反之,说明被检测的位点不存在甲基化。
2.亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)
用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP-直接测序方法。将PCR产物克隆至载体后进行测序,可以提高测序成功率,这种方法称为BSP-克隆测序法
客户提供:
细胞(≥106 个)、组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等样品材料,基因组DNA(体积≥20μl,浓度≥50 ng/μl)。
提供结果:
1.物序列、实验报告、包括MSP产物的电泳图片
2.扩增曲线、熔解曲线及实验报告
服务要求:
请认真填写荧光定量PCR检测技术服务委托单,并联系技术人员将委托单发送至:support@novland.com.cn。